CellTracker Blue CMAC Dye

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CellTracker™ Blue CMAC 詳細介紹：
CellTracker™ Blue CMAC 熒光染料可自由穿過細胞膜進入細胞，并在細胞內轉化為不透細胞膜的反應產物。 CellTracker™ Blue CMAC 染料在活細胞中保留了幾代。 染料被轉移到子細胞，而不是群體中的相鄰細胞。 CellTracker™ Blue CMAC 染料設計為顯示至少 72 小時的熒光，該染料具有理想的示蹤特性：在工作濃度下穩定、無毒、在細胞中保留良好，在生理 pH 值下發出明亮的熒光。 此外，CellTracker™ Blue CMAC 染料的激發和發射光譜與 GFP（綠色熒光蛋白）和 RFP（紅色熒光蛋白）光譜完全分離，可進行多路復用。

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CellTracker™ 藍色 CMAC（7-氨基-4-氯甲基香豆素）是一種非常適合監測細胞運動或位置的熒光染料。此染料保留良好，因此可對細胞運動進行多代追蹤。藍色激發/發射光譜適用于使用綠色和紅色熒光染料和蛋白的多通路技術。
•易于使用—去除培養基，添加染料，孵育30分鐘，進行細胞成像
• 熒光信號保留 >72 小時（通常3至6代）
• 適用于多通路技術的藍色激發/發射光譜（最大值為 353/466 nm）
• 低細胞毒性—不影響活力或增殖

CellTracker™ 藍色 CMAC 熒光染料設計用于自由穿過細胞膜進入細胞，在其中轉化為細胞膜不可透過性反應產物。CellTracker™ 藍色 CMAC 染料可在活細胞中保留多代。該染料可轉移到子細胞中，但不會轉移到群體中的相鄰細胞中。CellTracker™ 藍色 CMAC 染料設計用于顯示熒光至少72小時，且染料表現出理想的追蹤特性：在工作濃度下保持穩定且無毒性，可穩定保留在細胞中，且在生理 pH 值下可發出明亮的熒光。此外，CellTracker™ 藍色 CMAC 染料的激發和發射光譜與 GFP（綠色熒光蛋白）和 RFP（紅色熒光蛋白）光譜分離良好，可用于多通路技術。

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CellTracker Blue CMAC Dye 染料特點：
※  熒光信號保留時間>72 小時（通常為三到六代）
※  藍色激發/發射光譜（353/466 nm 最大值）是多路復用的理想選擇
※  低細胞毒性——不影響活力或增殖

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CellTracker 藍色、綠色和紅色染料進行多色圖像分析

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實驗步驟：
1. 使用無水 DMSO 將 CMAC 固體溶解，配制成 10 mM 的儲存液。使用無血清的培養基將儲存液稀釋至 0.5~25 μM 的工作液。在使用之前將工作液置于 37℃進行預熱。
2. 根據不同的細胞類型在不同的細胞培養條件下孵育 15~45 分鐘。對于懸浮細胞，離心棄上清，收集細胞沉淀。用預熱的染色液重懸細胞；對于貼壁細胞，當細胞生長到合適的細胞密度，移除上清培養液，加入預熱的染色液。
3. 移除染色液，加入新鮮預熱的細胞培養基，37℃孵育 30 分鐘。
4. 對于懸浮細胞，吸取 5 μl 左右染色后的細胞滴至載玻片上，加蓋蓋玻片，置于熒光顯微鏡下觀察；對于貼壁細胞，直接觀察即可。（可選）如需固定細胞，可先跳過步驟 4，待固定步驟完成后再做觀察準備。
5. 使用 PBS 清洗細胞。
6. 使用含有 3.7%多聚甲醛的 PBS 固定細胞，室溫孵育 15 分鐘。
7. 使用 PBS 清洗細胞。
8. 如果需要可對細胞膜進行透化處理。當細胞需要進行抗體標記時，細胞膜的透化處理是有必要的，便
于促進抗原進入細胞。可以使用冰冷丙酮處理細胞 10 分鐘，可以提供細胞的滲透性。
實驗說明：
※ 根據不同的實驗需求選擇合適的染色液濃度，建議在正式實驗之前做了一個倍比稀釋的**濃度測試。
※ 通常情況下，長時間染色（超過 3 天）使用染色液濃度為 5~25 µM, 短時間染色使用低濃度的染色液濃度 0.5~5 µM，比如細胞活性分析實驗。
※ 為了維持正常的細胞生理形態，避免給細胞帶來不必要的損傷，在達到染色效果的目的的情況下，盡可能地使用低濃度的染色液。

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